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          干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的使用方法

          更新時(shí)間:2015-08-26 點(diǎn)擊次數(shù):1347
               干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合,如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,這時(shí)需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子;又如需要測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中分泌某種物質(zhì)(抗體、生長(zhǎng)因子)的能力;或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無(wú)血清培養(yǎng)基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標(biāo)。
              目前,血清仍是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長(zhǎng)狀況不良時(shí),常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛以后,再換成無(wú)血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過(guò)程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無(wú)血清培養(yǎng)。在降低過(guò)程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠長(zhǎng)期培養(yǎng)于無(wú)血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。
              為了使細(xì)胞適應(yīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基,關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞:
              1.處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期
              2.>90% 活細(xì)胞率
              3.適應(yīng)時(shí)以較高的起始細(xì)胞接種
             

          細(xì)胞適應(yīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的方法

              1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)中。
              一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng),接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×10~3.5×10細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10~3×10細(xì)胞/ml時(shí),傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×10~4×10細(xì)胞/ml時(shí),細(xì)胞*適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10~3×10細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
              2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
              (1)以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
              (2)當(dāng)細(xì)胞密度>5×10細(xì)胞/ml時(shí),以2×10到3×10細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
              (3)以2×10到3×10細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
              (4)當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10到3×10細(xì)胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
              (5)每隔3到5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×10到3×10細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
              干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的產(chǎn)品說(shuō)明信息可能還不夠細(xì)致和全面,如果您需要更詳細(xì)了解干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的相關(guān)信息或索取相關(guān)資料,歡迎隨時(shí)與我!
           

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